Caracterización molecular del gen PCCB análisis y expresión de mutaciones causantes de acidemia propiónica
- Autores: Silvia Muro Galindo
- Directores de la Tesis: María Belén Pérez González (dir. tes.), Magdalena Ugarte (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 1999
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: María Median Jose (presid.), Carmen Aragón Rueda (secret.), José Fernández Piqueras (voc.), Miguel Angel Peñalva (voc.), Fausto Garcia Hedgarot (voc.)
- Materias:
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- Resumen
La acidemia propiónica, uno de los errores congénitos más frecuentes del metabolismo de ácidos orgánicos en humanos, está causada por la deficiencia del enzima mitocondrial propionil-CoA carboxilasa. Éste es un exnima heteropolimérico, estando constituido por dos tipos de subuniddes diferenes, a-y b-PCC, codificadas por los genes PCCA y PCCB respectivamente.
En este trabajo se ha abordado el estudido de las bases moleculares de esta enfermedad, caracerizando, en primer lugar, la estrucutra del gen PCCB, en su región codificante, indentificándose los límites entre los diferentes exones e intrones y permitiendo el diseño de oligonucleótidos intrónicos facilitando así el análisis genético de los pacientes. El estudio mutacional realizado ha permitido la indentificaicón de un total de 25 mutaciones diferentes entre los 47 pacientes analizados, lo que supone el 98% de los 80 alelos independientes estudiados, 21 de las cuales son mutaciones nuevas, no descritas anteriormente.
Asimismo, se ha llevado a cabo la caracterizaicón del efecto de las mutaciones identificadas utilizando diferentes aproximaciones experimentales.
Los ensayos de Northern y Western blot han permitido conocer el efecto de estos cambios sobre el mRNA y proteína B-PCC habiéndose estudiado, adicionalmente la síntesis y estabiliad in vitro de péptidos mutantes, su afectación sobre los procesos de importació ny procesamiento intramitocondrial, plegamiento y ensemblaje de las subunidades B-PPC.
Por último, los datos experimentales, junto con la información obtenida acerca del diagnóstico, clínica y seguimiento de estos pacientes, han permitido analizar la asociación entre la naturaleza de los cambios encontrados y la severidad de la enfermedad, lo que revela una clara asociación de ciertas mutaciones con fenotipos severos, mientras que otras estána sociadas a una sintomatología más suave.
