Desarrollo y estandarización de técnicas de PCR múltiple para el diagnóstico diferencial de enfermedades infecciosas animales de importancia económica

• Autores: Jovita Fernández Pinero
• Directores de la Tesis: Montserrat Agüero (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2005
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Manuel Sánchez (presid.), Miguel Angel Jiménez-Clavero (secret.), Lucas Javier Domínguez (voc.), José María Almendral del Río (voc.), María Luisa Salas Falgueras (voc.)
• Materias:
  • Ciencias agrarias
    • Ciencias veterinarias
      • Genética
      • Virología
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• Resumen

  • La enfermedades infecciosas víricas animales que forman parte del previa LISTA A de la Oficina Internacional de Epizootias (OIE) constituyen un problema constante de importantes consecuencias sanitarias y económicas para los sectores ganaderos. Algunas de ellas cursan con síntomas y lesiones similares en el ganado porcino, como son las enfermedades de tipo hemorrágico Peste Porcina Africana (PPA) y Peste Porcina Clásica (PPC), o de tipo vesicular Fiebre Aftosa (FA), Enfermedad Vesícula Porcina (EVP) y Estomatitis Vesicular (EV). En estos casos, es esencial realizar un diagnóstico de laboratorio diferencial para confirmar la etiología del agente causal y poder implementar las adecuadas medidas sanitarias.

    Entre las distintas técnicas de diagnóstico, la PCR se ha convertido, por su rapidez, especificidad y sensibilidad, en un apoyo importante para los programas de vigilancia epidemiológica, control y erradicación. Los objetivos principales de esta tesis han sido el desarrollo y estandarización de un método de RT-PCR múltiple para el diagnóstico simultáneo y diferencial de las enfermedades hemorrágicas de la lista A de la OIE:PPA y PPC, y un método de RT-PCR múltiple para el diagnóstico simultáneo y diferencial de las enfermedades vesiculares de la lista A de la OIE; FA, EVP y EV.

    La RT-PCR múltiple para la detección de los virus de PPA/PPC (VPPA y VPPC) emplea dos parejas de primeras, cada una de ellas específica para uno de los virus, diseñadas en regiones del genoma viral altamente conservadas y en el caso de VPPC, especialmente seleccionadas para ser divergentes respecto de los pestivirus BVDV (diarrea vírica bovina) y BDV (enfermedad de Border), genéticamente relacionados con él. La especificidad de la reacción múltiple se evaluó mediante el análisis de una amplia colección de aislados virales del VPPA y del VPPC, así como de otros virus animales relacionados, principalmente BVDP y DBV.

    Por otro parte, se seleccionaron 3 parej