Análisis de los dos promotores alternativos del gen de la ATPasa de Calcio del retículo sarco/endoplásmico de Artemia franciscana

• Autores: Ana Martínez Lamparero
• Directores de la Tesis: Leandro Sastre (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2001
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Ana Aranda Iriarte (presid.), Miguel Manzanares Fourcade (secret.), Jesús Cruces Pinto (voc.), Ignacio Palmero Rodríguez (voc.), Enrique Martín Blanco (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
      • Genética bioquímica
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• Resumen

  • La ATPasa de calcio del retículo sarco/endoplásmico (Sarco/Endoplasmic Reticulum CaATPase, SERCA) es una proteína integral de membrana implicada en el transporte de calcio desde el citoplasma al retículo sarcoplásmico de las células musculares o al endoplásmico de las no musculares.

    Esta proteína presenta en el crustáceo Artemia franciscana dos isoformas distintas que se expresan en diferentes tejidos. Una de ellas está codificada por un mRNA de 4.5 kb que se expresa en músculo y la otra por un mRNA de 5.2 kb que se expresa en la totalidad de los tejidos. Cada uno de estos mRNAs se transcribe desde uno de los dos promotores alternativos que posee este gen. El estudio de los dos promotores que presenta este gen en el curstáceo Artemia franciscana ha sido el objetivo de esta Tesis.

    Se ha intentado identificar y caracterizar las principales regiones reguladoras presentes tanto en el promotor muscular (Pr 1) como en el promotor no muscular (Pr 2). Por un lado se han realizado estudios de unión de proteínas nucleares de Artemia a los promotores mediante técnicas de protección a digestión por Dnasa I. Ambos promotores presentan zonas protegidas cuando se incuban sondas de dichos promotores con extractos de nauplias. Estas regiones no aparecen cuando se incuban dichas sondas con extractos de quistes, lo que sugeriría la existencia de distintos factores de transcripción en embriones enquistados y en nauplias. También se han realizado ensayos funcionales mediante técnicas de expresión transitoria en células de mamíferos. Los dos promotores son activos en células de mamífero, si bien el promotor muscular presenta una más baja actividad. En células de insecto la actividad de ambos promotores es muy baja. Los estudios realizados han permitido detectar en el promotor no muscular regiones reguladoras de la actividad transcripcional situadas a 1.2-1.4 kb del origen de transcripción, una activadora, en la zona más distal d