Ayuda
Ir al contenido

Dialnet


Detecció i anàlisi de la persistència de les bifidobactèries en aigües per a la determinació de lorigen de la contaminació fecal mitjançant tècniques de cultiu i mètodes moleculars qualitatius i quantitatius

  • Autores: Xavier Bonjoch Fornos
  • Directores de la Tesis: Anicet R. Blanch (dir. tes.)
  • Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2005
  • Idioma: catalán
  • Tribunal Calificador de la Tesis: Joan Jofre Torroella (presid.), Francisco Lucena (secret.), Jorge Lalucat Jo (voc.), Manel Poch (voc.), Ferran Ribas Soler (voc.)
  • Materias:
  • Enlaces
    • Tesis en acceso abierto en: TDX
  • Resumen
    • català

      El gènere "Bifidobacterium" adquireix una gran importància com a microorganisme indicador de contaminació fecal. És un dels gèneres predominants en la microbiota intestinal humana i dalguns animals de sang calenta arribant a unes concentracions entre 109 i 1010 cèllules/g de femta. La fisiologia anaeròbia, els requeriments nutricionals complexes i la seva incapacitat de multiplicar-se per sota dels 30ºC, fan que "Bifidobacterium" no pugi replicar-se a nivell extraentèric.

      Lobjectiu daquesta tesi ha estat la optimització de les tècniques presents per a la detecció de "Bifidobacterium" spp. en mostres daigua residual per a la possible utilització de certes espècies daquest gènere bacterià com a indicadores de la contaminació fecal i determinar lorigen daquesta:

      1. Avaluar lenumeració de "Bifidobacterium" spp. en tres medis selectius diferents, i comparar les diferents poblacions bacterianes de "Bifidobacterium" analitzades amb altres indicadors microbians en aigües.

      2. Definir proporcions entre les diferents poblacions dindicadors i les bifidobactèries que permetin diferenciar lorigen humà o animal de la contaminació fecal en aigües.

      3. Determinar quines espècies de "Bifidobacterium" que shan associat prèviament com exclusives dels humans, es troben només en aigües residuals urbanes.

      4. Desenvolupar una tècnica molecular per a la detecció de les espècies de "Bifidobacterium" associades exclusivament a aigües residuals dorigen humà.

      5. Analitzar lús combinat daquest nou mètode molecular amb la proporció de les bifidobactèries fermentadores de sorbitol i de les bifidobactèries totals en el medi selectiu HBSA.

      6. Desenvolupar una PCR quantitativa en temps real per a la detecció de les espècies "B. adolescentis" i "B. dentium".

      7. Comparar les dues tècniques moleculars desenvolupades, PCR múltiple ADO-DEN i PCR quantitativa en temps real en aigües residuals dorigen humà.

      8. Comparar la persistència de les poblacions indicadores de la contaminació fecal en aigües juntament amb el gènere "Bifidobacterium" en aigua de riu.

      Els medis selectius analitzats per a "Bifidobacterium", Beerens, HBSA i BFM, van presentar unes enumeracions molt similars en aigües residuals, proporcionant una elevada especificitat per a les bifidobactèries. No obstant, el medi Beerens i HBSA van recuperar un nombre significativament igual i més elevat de bifidobactèries cultivables.

      La hibridació colonial amb la sonda "Bif" permet una confirmació pràctica de les enumeracions, donant una correcció de la fracció de creixement no específic que donen el medis utilitzats.

      La proporció de les colònies de "Bifidobacterium" fermentadores de sorbitol respecte el nombre de colònies totals crescudes en el medi HBSA és una eina eficaç per a la determinació de lorigen de la contaminació fecal.

      Les espècies "B. adolescentis" i "B. dentium" van presentar una elevada especificitat per a les aigües dorigen humà, tot i que no es pot descartar la presència de B. adolescentis en alguna espècie daviram.

      El desenvolupament de la PCR múltiple ADO-DEN per a les espècies "B. adolescentis" i "B. dentium" és una eina molecular complementària per a caracteritzar lorigen de la contaminació fecal en aigües. Presenta un llindar de detecció 103 UCF/100mL.

      Les PCRs quantitatives específiques desenvolupades permeten la quantificació de les espècies "B. adolescentis" i "B. dentium" proposades com a indicadores de la contaminació fecal humana en aigües residuals dorigen humà. Aquesta tècnica presenta un llindar de detecció més alt que la de la PCR múltiple ADO-DEN essent de 104 UCF/100mL. Hi ha una diferencia significativa (P<0,05) en les inactivacions de totes les poblacions bacterianes a lestiu respecte les inactivacions a lhivern on són més baixes.

      El gènere "Bifidobacterium" és potencialment un bon indicador de lorigen de la contaminació fecal recent en aigües. La seva baixa persistència en lentorn fa però menys operatiu el seu ús quan la contaminació fecal és remota en el temps.

    • English

      The genus "Bifidobacterium" is proposed as indicators to identify the source of fecal pollution, since certain "Bifidobacterium" spp. are found only in humans, since it is abundant in the intestinal microbiota of humans and other warm-blooded animals. These organisms could be used to distinguish between human and animal pollution. They are found at a concentration of between 109 and 1010 cells/g in feces. Additionally, their anaerobic physiology, complex nutritional requirements and inability to multiply below 30ºC mean that they are unlikely to reproduce in extraenteric environments.

      The objective of this thesis has been the optimization of the techniques presents for the detection of "Bifidobacterium" spp. in samples of residual water.

      The selective media analyzed for "Bifidobacterium", Beerens, HBSA and BFM, they presented some very similar enumerations in residual water, provided a high specificity for the detection of bifidobacteria. Nevertheless, the enumeration of bifidobacteria was evaluated using three selective media. Beerens and HBSA media showed similar recoveries, with no statistically significant difference and BFM showed statistically different recovery for Bifidobacterium than the recovery on Beerens and HBSA media.

      The confirmation by colony hybridization of colonies of "Bifidobacterium" grown on the selective media revealed that some colonies belong to anaerobic bacterial genera other than bifidobacteria. The HBSA medium allows the calculation of the ratio Y/T that showed to distinguish fecal pollution origin. Values of this ratio higher than 0.20 indicate human origin. Values below 0.20 indicate animal origin. These results support previous studies postulating the use of sorbitol-fermenting bifidobacteria as human fecal indicators in sewage In this study a multiple PCR for "B. adolescentis" and "B. dentium" species was developed to be used as a complementary molecular tool to characterize the origin of the fecal contamination in water. The threshold of this technique is 103 CFU/100mL. In order to quantify both species a quantitative PCR for "B. adolescentis" and "B. dentium" (proposed as indicators for human fecal contamination in residual water of human origin) was developed. This technique presents a threshold higher than the PCR multiple ADO-DEN being of 104 UCF/100mL.

      The genus "Bifidobacterium" is potentially a good indicator of the origin of the recent fecal contamination in water. But its low persistence in the environmental waters is a handicap when the fecal pollution is not recent. "


Fundación Dialnet

Dialnet Plus

  • Más información sobre Dialnet Plus

Opciones de compartir

Opciones de entorno