Estudio del promotor de actina 403 de Artemia clonación y estudio del factor SRF de Artemia

• Autores: Marie-Carmen Casero Martín
• Directores de la Tesis: Leandro Sastre (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2000
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Roberto Marco Cuéllar (presid.), Mario Vallejo Fernández de la Reguera (secret.), Ana Aranda Iriarte (voc.), Ángel Luis Corbi Lopez (voc.), Javier León Serrano (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Biología molecular
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• Resumen

  • En una primera parte del trabajo se describe el estudio del promotor del gen Actina 403(PrAct403) de Artemia cuya expresión está inducida durante el desarrollo embrionario. Se identificó una zona esencial para la actividad promotora situada entre los nucleótidos -176 y 122. El Elemento de Respuesta a Suero(SER), parcialmente incluido en esa región, esta implicando en el control de la actividad de PrAct403 en células en cultivo. El Factor de Respuesta a Suero (SRF) de las células en cultivo se une a este SER y regula el promotor al ser activado por las vías dependientes e independientes de TCF. Ensayos de retardo con extractos de quistes y nauplias indican la existencia en Artemia de un factor capaz de unirse al SER de PrAct403.

    Al sospechar que este factor podía ser un SRF, se intentó clonar el posible homólogo en Artemia, tal como se describe en la segunda parte del trabajo. Por rastreo de genoteca y por PCR anclada, se aislaron 2 clones cuya secuencia resulta en un cDNA que codificaria una proteina (SRFArt) muy similar a factores SRFs de otras especies. La expresión del mensajero de SRF Art no varía durante el desarrollo. Mientras, la actividad de unión de extractos nucleares al SER, que refleja posiblemente la cantidad y/o actividad de la proteína SRFArt, aparece muy disminuida en quistes comparado con nauplias de Artemia. Esto sugiere una regulación traduccioal y/o post-traducional del factor durante el desarrollo. La expresión del mensajero se detecta únicamente en los tejidos de origen ectodérmico. Por otra parte, el gen Actina 43 se expresa en los mismos tejidos que el mensajero de SRFArt, por lo que SRFArt podría estar implicado en procesos de diferenciación de tejidos ectodérmicos en Artemia y podría regular la expresión de genes como Actina 403.

    En una tercera parte se presenta un estudio funcional de SRFArt sobreexpresado en celulas de mamifero. SRFArt reprime en la actividad del promotor PrAct403 con