Identificació dels factors genètics que determinen la variabilitat dels nivells de FVII a la població espanyola. Resultats del Projecte GAIT
- Autores: Maria Sabater Lleal
- Directores de la Tesis: José Manuel Soria Fernández (dir. tes.), Lluïsa Vilageliu Arqués (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2007
- Idioma: catalán
- Tribunal Calificador de la Tesis: Núria Pujol Moix (presid.), Daniel Grinberg Vaisman (secret.), Jesús Martín Campos (voc.), Javier Corral de la Calle (voc.), Eduardo Tizzano Ferrari (voc.)
- Materias:
- Enlaces
- Tesis en acceso abierto en: TDX
- Resumen
La trombofilia és la tendència genètica al tromboembolisme venós. Amb la finalitat daprofundir en les bases genètiques de la trombofília hereditària, lobjectiu principal daquesta tesi és la identificació dels factors genètics que determinen la variabilitat dels nivells de FVII a la població espanyola.
En primer lloc, es va calcular lheretabilitat dels nivells de FVII en un 53%, i mitjançant una anàlisi global del genoma es va localitzar el gen responsable de la variabilitat dels nivells de FVII en la zona 13q, just on es localitza el gen estructural del FVII "(F7)". Aquest resultat indica que els factors genètics que determinen la variabilitat de FVII en plasma es troben en el gen estructural.
A continuació es va realitzar una anàlisi genètica exhaustiva i es van obtenir 49 posicions polimòrfiques al llarg del gen "(F7)", la majoria canvis duna sola base (SNPs). A més, mitjançant una anàlisi de lorganització haplotípica de la variació en la seqüència del "(F7)", es va observar que existeixen tres clars llinatges dhaplotips que shan mantingut parallelament en la població espanyola per selecció estabilitzadora, molt probablement per un avantatge dels individus heterozigots. Lanàlisi dassociació entre aquests llinatges i els nivells de FVII indica que un dells, caracteritzat pels allels [-670C, -630G, -402A] està associat a nivells elevats en la població, i un altre, caracteritzat pels allels [-2989A, -401T, -323ins10, -122C] està associat a nivells reduïts.
Les anàlisis posteriors de transfecció "in vitro" amb els diferents allels utilitzant un sistema "reporter" GFP "(Green Fluorescent Protein)" van permetre determinar que les variants 323ins10 i 122C tenen un efecte reductor sobre els nivells de proteïna, i que la variant 402A provoca un augment significatiu dels nivells de FVII. Finalment, la nova variant 2989A incrementa també de forma molt significativa els nivells dexpressió. Aquests resultats es confirmen a més en un estudi cas-control amb pacients amb trombosi venosa profunda, així com en dues famílies amb deficiència de FVII.
El disseny, lestratègia i la metodologia emprades són un bon exemple de com localitzar i identificar "loci" implicats en caràcters complexes.
"SUMMARY:
There is a definite genetic predisposition to venous thromboembolism. The levels of FVII in plasma has been clearly implicated in thrombophilia. The aim of this thesis was to identify and characterize the genetic factors that determine the variability of FVII plasma levels in the Spanish population.
First, the heritability of FVII levels was calculated as 53%indicating a substantial genetic component. A Genome Wide Scan allowed the localization of the responsible gene on the long arm of chromosome 13, exactly where the FVII (F7) structural gene has been located. This indicates that the genetic factors that determine FVII variability are localized in the structural gene.
Second, from an exhaustive genetic analysis, we obtained 49 polymorphisms (variants) in the F7 gene. Further, by an analysis of sequence variations and haplotype organization, three main haplotype lineages were detected that have been maintained presumably by balanced selection, probably due to an advantage of heterozygous individuals. The association analysis among these lineages and the FVII levels indicates that one of these lineages, containing allelic variants [-670C, -630G, -402A] was associated with elevated FVII levels. Also, another lineage, containing allelic variants [-2989A, -401T, -323ins10, -122C] was associated with reduced levels of FVII.
Posterior functional analyses of in vitro transfection of the different variants in a reporter system with GFP (Green Fluorescent Protein) showed that allelic variants 323ins10 i 122C significantly reduce expression levels while allelic variant 402A significantly increases them. The new allelic variant 2989A also increases expression levels significantly. Finally, these results have been confirmed in a case-control study with patients with deep venous thrombosis and in a study of two families with a FVII deficiency.
The strategy and methodology of the present work are good examples of how to localize and identify genes implicated in complex human diseases. "
