Anàlisi molecular dels gens "BRCA1" i "BRCA2" en el càncer de mama hereditari. Caracterització de mutacions recurrents i estudi de variants defecte biològic desconegut.
- Autores: Berta Campos Estela
- Directores de la Tesis: Orland Díez (dir. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2007
- Idioma: catalán
- Tribunal Calificador de la Tesis: Oriol Bachs Valldeneu (presid.), Josep Oriola Ambrós (secret.), Joan Brunet i Vidal (voc.), Joan Xavier Comella i Carnicé (voc.), Enrique Lerma Puertas (voc.)
- Materias:
- Enlaces
- Tesis en acceso abierto en: TDX
- Resumen
El càncer de mama és la neoplàsia més freqüent en la dona a Catalunya, amb una prevalença de 45.000 casos lany 2005. Entre un 5% i un 10% de tots els casos presenta un component hereditari degut a mutacions germinals en gens de susceptibilitat, fonamentalment BRCA1 i BRCA2, els quals sassocien a la síndrome de càncer de mama i ovari hereditari (CMOH), caracteritzada per la presència de casos de càncer de mama i ovari en una mateixa família o de múltiples casos de càncer de mama precoç.
Lobjectiu principal daquest treball és lestudi molecular dels gens BRCA1 i BRCA2 en pacients amb sospita de síndrome de CMOH. La identificació de mutacions en aquests pacients facilita lassessorament genètic i laplicació de mesures de prevenció, detecció precoç i terapèutiques adequades.
Els mètodes utilitzats per a la detecció de mutacions en BRCA1 i BRCA2 són lanàlisi de conformacions de cadena senzilla (SSCP), lanàlisi de la proteïna truncada (PTT) i la seqüenciació dels fragments amb mobilitat electroforètica anormal. Els nostres resultats mostren que les famílies espanyoles amb CMOH presenten una gran diversitat allèlica en els gens BRCA1 i BRCA2, amb les mutacions distribuïdes al llarg de tota la seqüència. La freqüència global de mutacions identificades (propera al 30%) és similar a la trobada en altres poblacions i, en general, el percentatge de mutacions augmenta amb el nombre de casos de càncer en la família. A més, sevidencia la relació entre càncer dovari i BRCA1 i càncer de mama en homes i BRCA2.
Addicionalment, sha analitzat lhaplotip associat a tres mutacions que apareixen de forma recurrent en diverses famílies, mitjançant lestudi de marcadors microsatèllits polimòrfics. La identificació dhaplotips específics associats a la mutació 330A>G en BRCA1, present en famílies dorigen gallec, i a les mutacions 9254del5 i 6857delAA en BRCA2, presents en famílies de làrea mediterrània, suggereix lexistència de subpoblacions espanyoles amb mutacions característiques.
Finalment, sha avaluat la possible patogenicitat de les variants defecte biològic desconegut identificades durant el procés de detecció de mutacions. Aquestes variants no es poden classificar, únicament amb la informació que ens proporciona lestudi del DNA, com a mutacions associades a la malaltia o com a polimorfismes innocus, de manera que dificulten lassessorament genètic dels pacients i requereixen anàlisis addicionals. Per exemple, lanàlisi de lRNA missatger de portadors permet establir possibles efectes en el procés de maduració de lRNA (splicing). Malgrat que existeixen diversos mètodes teòrics per predir potencials alteracions en lsplicing, els resultats observats amb lestudi de lRNA no coincideixen totalment amb els obtinguts amb aquests mètodes, pel que shan de considerar amb prudència i es recomana lanàlisi de lRNA sempre que sigui possible.
"SUMMARY:
"Molecular analysis of BRCA1 and BRCA2 genes in the hereditary breast cancer. Characterization of recurrent mutations and study of unclassified variants".
TEXT:
Breast cancer is the most common malignancy among woman in Catalonia, with a prevalence of 45.000 cases in 2005. It is currently estimated that 5-10% of all breast cancers are hereditary and attributable to mutations in several highly penetrant susceptibility genes of which only two have been identified: BRCA1 and BRCA2. BRCA1 and BRCA2 mutations are associated with the hereditary breast and ovarian cancer (HBOC) syndrome, characterized for the presence of both breast and ovarian cases in the same family or for several cases of early onset breast cancer.
The principal aim of this thesis is the molecular study of BRCA1 and BRCA2 genes in patients with HBOC syndrome. The identification of mutations in these patients facilitates the genetic assessment and the application of preventive measures, early detection and appropriate therapeutics.
Analyses of the entire coding and flanking sequences were carried out by a combination of SSCP (single strand conformation polymorphism) and PTT (protein truncation test), followed by direct sequencing of abnormal bands. Our results show that HBOC Spanish families present a high allelic diversity in BRCA genes, with mutations distributed all over the sequence. The global frequency of mutations detected (of about 30%) is similar to that founded in other populations and, in general, the rate of mutations increases with the number of cancer cases in the family. Furthermore, ovarian cancer associates to BRCA1 and male breast cancer to BRCA2.
Additionally, we analysed the haplotype associated to three mutations which appear recurrently in several families, employing microsatellite markers. Identification of a specific haplotype associated to the 330A>G mutation in BRCA1, present in Galician families, and to the 9254del5 and 6857delAA mutations in BRCA2, present in Mediterranean families, suggests the existence of Spanish subpopulations with characteristic mutations.
Finally, we evaluated the pathological effect of variants of unknown pathological significance by RNA analysis. This information is essential for providing efficient counselling for breast/ovarian cancer families. "
