Análisis funcional de Rim8, una proteína de la familia de las arrestinas en Saccharomyces cerevisiae

• Autores: Antonio Herrador Fernández
• Directores de la Tesis: Vincent Olivier (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Autónoma de Madrid ( España ) en 2013
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Carlos Gancedo Rodríguez (presid.), Francisco Portillo Pérez (secret.), Ane Sesma (voc.), José González Castaño (voc.), Miguel Ángel Peñalva Soto (voc.)
• Materias:
  • Química
    • Bioquímica
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Biblos-e Archivo
• Resumen

  • En las células de mamíferos, las ß-arrestinas desempeñan la función clave de regular la endocitosis de los receptores de siete hélices transmembrana (7TM). Recientemente, la proteína PalF del hongo Aspergillus nidulans fue identificada como el primer miembro de la familia de las arrestinas fuera de los metazoos. PalF y Rim8, su homólogo en la levadura Saccharomyces cerevisiae, son componentes clave de la ruta de señalización de pH ambiental. En esta ruta denominada RIM en levadura, las proteínas 7TM, Rim21 y Dfg16, actúan corriente arriba de Rim8 y de la maquinaria endocítica ESCRT (del inglés ¿Endosomal Sorting Complex Required for Transport¿). Ya que las ß- arrestinas interaccionan con proteínas 7TM mediante sus dominios arrestina y con proteínas de la maquinaria endocítica mediante su región C-terminal, nos preguntamos si Rim8 podría llevar a cabo esta misma función en el contexto de la ruta RIM.

    En este trabajo demostramos que la región N-terminal de Rim8 interacciona de forma directa con la región C-terminal de la proteína 7TM Rim21. Asimismo, Rim8 interacciona de forma directa, mediante su región C-terminal, con la subunidad Vps23 del complejo ESCRT-I. De igual modo, demostramos que en extractos proteicos Rim8 está asociado a varias subunidades del complejo ESCRT-I y que esta asociación es fundamental para la transmisión de la señal de pH.

    Además, hemos caracterizado los determinantes moleculares que conjuntamente están involucrados en esta interacción: un motivo SXP y un residuo de lisina monoubicuitilado, ambos situados en el extremo C-terminal de Rim8 y altamente conservados.

    Por otro lado, demostramos que Rim8 es reconocido por la ubicuitina ligasa Rsp5 a través de un motivo PXY próximo al residuo ubicuitilado de Rim8. Esta ubicuitina ligasa monoubicuitila Rim8 porque la unión del dominio UEV (del inglés ¿ubiquitin E2 variant¿) de Vps23 al motivo SXP y a la ubicuitina conjugada impide que se extienda la cadena de ubicuitina. Proponemos un modelo en el cual la competición entre Rsp5 y Vps23 por la unión a la primera molécula de ubicuitina conjugada con Rim8 es responsable de este fenómeno.

    Por último, demostramos que Rim8 se localiza en focos situados en la membrana plasmática de manera dependiente de la activación de la ruta RIM y que colocaliza con este mismo patrón con Rim21 y Vps23 cuando se co-sobreexpresa junto con estas proteínas.