La descarboxilación del glutamato en Synechocystis sp. PCC 6803: Enzimas implicadas y función fisiológica.

• Autores: José Manuel Lucena Soto
• Directores de la Tesis: Pedro Candau Chacón (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Sevilla ( España ) en 2003
• Idioma: español
• Número de páginas: 138
• Tribunal Calificador de la Tesis: Jesús Díez Dapena (presid.), Agustín Vioque Peña (secret.), Antonia Herrero Moreno (voc.), Jordi Barbé García (voc.), Silvia Marqués Martín (voc.)
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Idus
• Resumen

  • Las cianobacterias constituyen el único grupo de organismos procariotas capaz de llevar a cabo una fotosíntesis oxigénica similar a la que realizan las plantas superiores (Blankenship, 1992; Stanier y Cohen-Bazire, 1977), ya que poseen aparatos fotosintéticos situados en membranas tilacoidales y dos fotosistemas similares a los localizados en los cloroplastos. Se diferencia en que, excepto en proclorofitas, las cianobacterias carecen de clorofila b (Morden y Golden, 19919 y presentan pigmentos antena alternativos denominados ficobiliproteínas (Sherman et al., 1987).

    Respecto a sus características genéticas, las cianobacterias presentan una amplia variedad en su contenido G+C (32 � 71%), cubriendo el intervalo de calores encontrados en procariotas. El tamaño de sus genomas es muy variables (2 � 13 Mb) pudiendo exceder el de cualquier grupo bacteriano (Herdman et al., 19799. La mayoría son poliploides, ya que poseen en torno a 12 copias cromosómicas por célula.

    Con objeto de dilucidar la existencia en Synechocystis sp. PCC 6803 de alguna ruta alternativa a la 2-oxoglutarato deshidrogenasa, que pudiese completar el ciclo de Krebs, y de determinar la implicación de la glutamato deshidrogenasa en este contexto, se plantearon los siguientes objetivos:

    Determinar la función fisiológica de la NADP-glutamato deshidrogenasa en el metabolismo general de Synechocystis, mediante estudios de expresión del gen gdhA y de la caracterización del mutante carente de actividad NADP-GDH.

    Investigar la existencia de la ruta del y-aminobutirato como vía alternativa a la 2-oxoglutarato deshidrogenasa en el ciclo de Krebs. Para ello, nos propusimos determinar la actividad de las enzimas que forman parte de dicha ruta y, aprovechando el conocimiento del genoma de Synechocystis, verificar la presencia en el mismo de los genes codificantes de estas enzimas. Una vez localizados, se procedería a la clonación de estos genes, a su expresión en Escherichia coli y a la purificación de las proteínas codificadas para su posterior caracterización físico-química. Al mismo tiempo, la obtención de mutantes en Synechocystis carentes de cada una de las enzimas de la ruta, nos facilitaría el análisis de su papel fisiológico.