Obtención de líneas de trigo con bajo contenido en epítopos responsables de la enfermedad celíaca mediante ARN de interferencia
- Autores: Javier Gil Humanes
- Directores de la Tesis: Francisco Barro Losada (dir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Córdoba (ESP) ( España ) en 2011
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: José Ignacio Cubero Salmerón (presid.), Teresa Millán (secret.), Jorge Dubcovsky (voc.), Paul Christou (voc.), Huw D. Jones (voc.)
- Materias:
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- Tesis en acceso abierto en: Helvia
- Resumen
En el presente trabajo se ha utilizado la transformación genética de trigo harinero para el silenciamiento de genes de gliadinas mediante ARN de interferencia (ARNi). En primer lugar se diseñaron vectores para el silenciamiento específico de las ¿-gliadinas. Las líneas transgénicas obtenidas mostraron silenciamientos de las ¿-gliadinas de entre el 77,4-85,5%, lo que produjo ligeros cambios en las propiedades del gluten y del almidón obtenidas por el Mixolab®. Sin embargo, para muchas de las líneas la supresión de las ¿-gliadinas no afectó a las propiedades de la masa, sugiriendo que las ¿-gliadinas no tienen un papel fundamental en la calidad harino-panadera. En segundo lugar se diseñaron nuevos vectores para el silenciamiento de todas las gliadinas, logrando reducciones de hasta un 95%. La calidad harino-panadera, medida mediante el test de sedimentación SDS, se mostró comparable con los controles no transformados para la mayoría de las líneas. A partir de la proteína del gluten se realizaron ensayos con clones de células T obtenidas de pacientes celíacos, obteniéndose una reducción muy significativa de la reactividad en las líneas transgénicas con silenciamiento de todas las gliadinas. La síntesis y deposición de las proteínas de almacenamiento en los cuerpos proteicos (CP) se estudió a lo largo del desarrollo del grano, observándose cambios en la forma y modo de agregación de los CP en las líneas con reducción de todas las gliadinas. También se observó un aumento en el número y tamaño de las inclusiones de los CP, en las que se ha descrito la presencia de triticinas.
Este trabajo confirma que el silenciamiento basado en ARNi puede ser usado para la reducción específica de grupos de proteínas codificadas por familias multigénicas como son las ¿-gliadinas o los tres grupos de gliadinas (¿-, ¿-, y ¿-gliadinas). El silenciamiento de todas las gliadinas produjo una drástica reducción de los epítopos relacionados con la enfermedad celíaca, por lo que las harinas resultantes podrían emplearse para la elaboración de productos libres de gluten aptos para celíacos.
