La maduración in vitro de los ovocitos en los caninos ha sido la principal limitante para lograr la fecundación y el desarrollo embrionario en cultivo. El estudio de la maduración, se ha basado en el desarrollo meiótico en la mayoría de los trabajos in vitro como indicador del estado de desarrollo de los ovocitos, no obstante, el proceso de maduración involucra la coordinación de eventos nucleares y también citoplasmáticos integrados pero básicamente independientes entre sí. En esta tesis se estudiaron eventos involucrados en la maduración extra nuclear del ovocito canino, como el desarrollo mitocondrial y de la zona perlúcida, caracterizando ultraestructuralmente y funcionalmente a través del tiempo de cultivo in vitro, como asimismo la capacidad de estos ovocitos en distintos tiempos de maduración, de ser penetrados por espermatozoides caninos. Los resultados mostraron que el diámetro de los agujeros era diferente entre los grupos (p< 0,05): 0.7 ± 0.1, 1,6 ± 0,2 y 1,4 ± 0,3 µm, para ovocitos inmaduros, ovocitos IVM por 72 y 96 h, respectivamente. Las diferencias en los tamaños de los agujeros entre los diferentes tiempos de maduración indicarían que el trabeculado de la superficie de la ZP está relacionado al estado de madurez del ovocito. Los ovocitos madurados en cultivo aunque lograron tener un patrón mitocondrial similar a los ovocitos madurados in vivo, los conglomerados mitocondriales fueron más pequeños, alcanzando sólo el 4, 11 y 17% de MII a las 48, 72, y 96 h, respectivamente. La penetración espermática fue directamente proporcional al tiempo de incubación, cuando se usaron espermatozoides frescos o refrigerados, (p<0,05); Sí hubo una diferencia significativa en el porcentaje de penetración total entre ovocitos inmaduros (47,3%) y ovocitos IVM (56,6%) a través de las 10 h de cultivo, independiente del tipo de espermatozoide.
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