Purificación, caracterización y mecanismos adaptativos de la glutamina sintetasa en la oxifotobacteria marina prochlorococcus
- Autores: Sabah El Alaoui
- Directores de la Tesis: Jesús Díez Dapena (dir. tes.), José Manuel García Fernández (codir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Córdoba (ESP) ( España ) en 2003
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: José Manuel Roldán Nogueras (presid.), J. Antonio Bárcena Ruiz (secret.), Francisco Miguel Cánovas Ramos (voc.), Pedro Piedras Montilla (voc.), José María Vega Piqueres (voc.)
- Materias:
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- Resumen
Se ha estudiado la regulación de la glutamina sintestasa (GS) de tres estirpes de Prochlorococcus (SS120, MED4, PCC9511), analizando los niveles de actividad transferasa (determinación espectrofotométrica del gamma-glutamil hidroxamato formado) y biosintética (determinación mediante HPLC de glutamina producida), así como la concentración intracelular de la proteína GS (determinada mediante inmunoelectroforesis cuantitativa).
La actividad glutamina sintetasa disminuía cuando los cultivos se sometían a ausencia de nitrógeno o en presencia de fuentes de nitrógeno no asimilables.
La ausencia de fósforo tenía un efecto aún más marcado sobre la actividad dela enzima.
El MSX provocaba una inactivación de la enzima menor que en otros organismos fotosintéticos; por otro lado, la adición de azaserina provocaba un incremento de la actividad. La oscuridad no afecvta de forma significativa la actividad de la enzima, en tanto que la respuesta antagónica de los inhibidores DCMU y DBMIB en alguna estirpe parece indicar que las plastoquinonas podrían estar implicadas en la regulación de esta enzima.
Por otro lado, la cuantificación de la concentración de proteína GS en extractos celulares de cultivos sometidos a diferentes condiciones mostró que la azaserina inducía un incremento en la concentración de la enzima; sin embargo, otras condiciones (ayuno de nitrógeno, adición de inhibidores como MSX, DCMU o DBMIB) no parecen afectar significativamente la concentración de la GS.
Hemos purificado la glutamina sintetasa de dos estirpes de Prochlorococcus (PCC9511 y SS120).
Se obtuvó una preparación eletroforéticamente homogéna. Se calcularon los valores de Km para los ensayos de actividad transferasa y biosintética, observándose valores similares entre ambas estirpes.
El peso molecular estimado fue de 48,6 kDa. La temperatura óptima para la actividad transferasa es de 55ºC, el pH óptimo de 7,5. Los resultados
