Resumen de Respuesta bacteriana al estrés oxidativo: cuantificacion de la expresion genica in vivo mediante retrotranscripcion y pcr multiple
Escherichia coli posee distintos regulones de defensa frente a situaciones de estrés. Mediante RT-PCR multiple se ha estudiado la regulación transcripcional de 17 genes, miembros de los regulones OxyR, SoxR/S, RpoS y MarA, en distintas condiciones de crecimiento y frente a diversos agentes estresantes (H2O2, paraquat, salicilato o NaC1). Se ha establecido la necesidad de fijar las condiciones de amplificacion mediante RT-PCR tipos C y T y la de incluir un estandar externo que monitorice posibles variaciones en la expresion del estandar interno o en control.
El crecimiento en medio nutritivo LB induce la transcripcion de los miembros del regulon OxyR (oxyR, KatG,dps, gorA y ahpCF). La osmolaridad de este medio podria explicar dicha induccion, al no detectarse esta en medio minimo pero si en respuesta a estrés con NaC1.
El H2O2, a dosis bajas (10 uM), induce el regulon OxyR y a concentraciones moderadas (100 uM) el regulon SoxR/S. Ambas inducciones son totalmente dependiente de los reguladores especificos (OxyR o SoxR, respectivamente).
El regulon SoxR/S(soxS, micF, tolC y marA) responde tambien a paraquat, salicilato y NaC1. En todos los casos es una respuesta especifica dependiente de SoxR.
La transcripcion del rob, homologo de soxS y marA, se reprime en respuesta a paraquat y salicilato, lo que explicaria el funcionamiento de ambos regulones en presencia de altos niveles basales de la proteina Rob.
El regulon RpoS(rpoS, katE y osmY) no se induce con oxidantes (H2O2 o parquat) pero si con salicilato (estrés acido) y NaC1(estrés osmotico).
