Análisis de las interacciones de polifenoles con el receptor GPllb/llla plaquetario y de sus efectos inmunomoduladores sobre células sanguíneas circulantes
- Autores: Cristina Zaragozá Arnáez
- Directores de la Tesis: Lucinda Villaescusa Castillo (dir. tes.), Melchor Álvarez de Mon Soto (codir. tes.), Jorge Monserrat Sanz (codir. tes.)
- Lectura: En la Universidad de Alcalá ( España ) en 2012
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Juan Tamargo Menéndez (presid.), María Teresa Martín López (secret.), Juana Benedí González (voc.), Luis San Román del Barrio (voc.), Ricardo Moreno Otero (voc.)
- Materias:
- Enlaces
- Resumen
- español
En la actualidad, los productos naturales constituyen un amplio campo en la investigación farmacológica, con grandes posibilidades para llegar al conocimiento de nuevas e interesantes moléculas. Muchos extractos de plantas o bien principios activos, se siguen empleando con éxito en terapéutica para indicaciones bien definidas, aunque poco se sepa de su mecanismo de acción. Éste es el caso de algunos polifenoles como flavonoides y cumarinas, que se comportan como antiagregantes plaquetarios con algunas singularidades que les hace diferenciarlos de los convencionales. Así, por ejemplo, algunos flavonoides como diosmina, son fármacos muy demandados como flebotónicos y controladores de la permeabilidad vascular. Este hecho podría sugerir que, si algunas prostaglandinas son las responsables de dicho control y, además, de la agregación plaquetaria, tal vez aquellos fármacos se comportarían como antiagregantes. Estos fenómenos guardan relación con los procesos inflamatorios, por lo cual también consideramos de interés la posibilidad de realizar estudios bioquímicos en relación con un posible efecto sobre los principales mediadores celulares que inciden sobre dichos procesos. Por esta razón, y con el fin de aclarar algunos aspectos relacionados con el mecanismo de acción de los flavonoides y cumarinas sobre la agregación plaquetaria y la modulación de mediadores proinflamatorios, estudiamos la ocupación del receptor plaquetario GPIIb/IIIa por dichos productos mediante citometría de flujo, así como la modulación de citoquinas proinflamatorias mediante ELISA. Los flavonoides y cumarinas objeto de estudio son naringina, naringenina, esculetina, cumarina y fraxetina. Los resultados del estudio de ocupación del receptor plaquetario GPIIb/IIIa muestran que todos los productos son capaces de unirse a dicho receptor, siendo naringina la que presenta un porcentaje de ocupación mayor, cuatro veces superior al de naringenina. En cuanto a las cumarinas, se comprueba que esculetina alcanza un porcentaje de ocupación dos veces superior al de cumarina y fraxetina. El estudio de la morfología de las plaquetas mediante citometría de flujo demuestra que los flavonoides naringina y naringenina, y las cumarinas esculetina, cumarina y fraxetina, presentan capacidad antiagregante. Naringina, a concentración 2mM, es el flavonoide que posee mayor actividad (90%); naringenina, esculetina y fraxetina presentan un efecto antiagregante entorno al 50% a concentración 2mM. La cumarina es el producto con menor capacidad antiagregante (25%). Del estudio de modulación de citoquinas proinflamatorias mediante ELISA se desprende que los flavonoides naringina y naringenina, así como las cumarinas esculetina, cumarina y fraxetina son capaces de inhibir la producción de IL-1β, TNF-α, IL-6 e IL-8 y por tanto intervienen también de forma indirecta, por medio de los monocitos, en la inhibición de la agregación plaquetaria. En cuanto a una posible relación entre la estructura química y la actividad farmacológica, podemos destacar que la presencia del azúcar en el heterósido flavónico intensifica la capacidad antiagregante; mientras que la genina es más activa que el glicósido en lo referente a la inhibición de citoquinas. Asimismo, la presencia de hidroxilos fenólicos en orto en la estructura cumarínica parece ser causa de la mayor actividad antiagregante que presentan esculetina y fraxetina, frente a cumarina. Sin embargo, la mayor potencia inhibitoria de algunas citoquinas, con excepción de TNF-α, la ejerce cumarina.
- English
Nowadays many active ingredients extracted from plants are used successfully in therapeutic indications, but their mechanism of action is still unknown. This is the case of some polyphenols such as flavonoids and coumarins, which have antiplatelet properties with some peculiarities. Some flavonoids such as diosmin are used as phlebotonics products and improve vascular permeability. This could suggest that if some prostaglandins control platelet aggregation, perhaps those drugs would behave as antiplatelet agents. These facts are related to inflammatory processes, so we also consider the possibility of relevant biochemical studies concerning a possible effect on the main cellular mediators that influence these processes. For this reason, and to clarify some aspects related to the mechanism of action of flavonoids and coumarins on platelet aggregation and modulation of proinflammatory mediators, we studied the platelet receptor occupancy of GPIIb/IIIa for such products by flow cytometry and the modulation of proinflammatory cytokines by ELISA. Flavonoids and coumarins assayed are naringin, naringenin, esculetin, coumarin and fraxetin. The results of the platelet receptor occupancy of GPIIb/IIIa show that all products are able to bind to this receptor although with a low occupancy rate. The assay of platelets morphology by flow cytometry shows that flavonoids and coumarins studied present antiplatelet activity. Naringin 2mM has the highest activity (90%). Naringenin, esculetin and fraxetin 2mM, have an antiplatelet effect around 50%. Coumarin gets the lowest results (25%). The study of modulation of proinflammatory cytokines by ELISA shows that flavonoids and coumarins studied are able to inhibit the production of IL-1β, TNF-α, IL-6 and IL-8 and therefore also intervene indirectly, by monocytes, over decreased platelet aggregation. About a possible relationship between chemical structure and pharmacological activity, we suggest the glycoside flavone exerts a higher antiplatelet activity than the aglycone, which is more active over inhibition of cytokines. Also, the presence of ortho phenolic hydroxyl coumarin in the structure could cause higher antiplatelet activity with esculetin and fraxetin than with coumarin. However, the greater inhibitory effect on some cytokines production, except on TNF-α, is exerted by coumarin.
- español
