Resumen de Evaluación del papel terapéutico de la inhibición del PAI en el tratamiento de la endometriosis en un modelo animal murino homólogo
Evaluación del papel terapéutico de la inhibición del PAI (inhibidor del activador del plasminógeno) en el tratamiento de la endometriosis en un modelo animal murino homólogo. HIPÓTESIS: La Inhibición del PAI-1 (inhibidor del activador del plasminógeno), y por tanto, la potenciación de la fibrinolisis endógena tendría un papel beneficioso sobre la endometriosis una vez bien establecidas las lesiones, cursando con disminución de las mismas, potencialmente mediado por inhibición de la angiogénesis, proliferación celular y un aumento de la apoptosis. OBJETIVOS PRIMARIOS Y SECUNDARIOS: Evaluación en un modelo animal murino homólogo del papel terapéutico de la inhibición del PAI-1 en el tratamiento de la endometriosis mediante determinación de su efecto sobre el tamaño de las lesiones. Evaluar si las acciones de inhibición del PAI-1 cursan con: afectación de la fibrinolisis, la matriz extracelular, la angiogénesis, la proliferación celular, la apoptosis y el reclutamiento de células inmunes. METODOLOGÍA: Para llevar a cabo dicho proyecto se implantó en tejido subcutáneo de ratones hembra (n=9) inmunocompetentes 1 fragmento de tejido endometrial obtenido de ratones hembra de la misma cepa previamente marcado con proteína fluorescente m-cherry. Durante 2 semanas se les administró a los animales triplaxtinin (ó PAI-039) como compuesto inhibidor de PAI-1 o placebo y se monitorizó de manera no invasiva el tamaño de los fragmentos a partir de la cuantificación de la fluorescencia emitida por la proteína de marcaje. La monitorización de la señal se llevó a cabo mediante un aparato Carestream acoplado a un aparato de anestesia inhalatoria. La cuantificación de la señal se determinó mediante software de J image asociado al Carestream. Al finalizar la monitorización se procedió al sacrificio de los animales y obtención de las lesiones endometriósicas. Se realizó un análisis inmunohistoquímico-histológico de las lesiones: se sometieron a inmunohistoquímica a fin de identificar marcadores específicos de vascularización (?-SMA, isolectina B4), proliferación (Ki-67), glándulas (citoqueratina), fibrina, m-Cherry, leucocitos (CD45) y macrófagos (F4/80); a tinción tricrómica para determinación del colágeno (KN) y a la técnica del TUNEL para determinar la apoptosis. Las señales obtenidas fueron cuantificadas objetivamente mediante software de análisis de imagen específico (Image proplus) utilizando macros previamente utilizadas por nuestro grupo (Gomez y cols 2011). La existencia de diferencias significativas entre los dos grupos fueron evaluadas estadísticamente mediante tests paramétricos o no paramétricos atendiendo a la distribución homogénea o no de los datos obtenidos. RESULTADOS: El tratamiento con PAI-039 demostró una reducción significativa en el tamaño de las lesiones endometriósicas sin llegar a eliminarlas por completo a la dosis testada.Respecto al análisis inmunohistoquímico-histológico se realizó una caracterización las lesiones endometriósicas obtenidas para compararlas con las lesiones humanas observándose una similitud en cuanto al número de glándulas, depósitos de colágeno e inflamación local. A su vez se realizó una cuantificación de la fibrinolisis, la vascularización, la proliferación y la apoptosis obteniéndose una disminución de las tres primeras en el grupo tratado con PAI-039 vs el control; sin embargo no fuimos capaces de detectar diferencias en cuanto a la apoptosis debido a la escasa cantidad de células apóptoticas detectadas en ambos grupos. CONCLUSIONES: La obtención, marcaje fluorescente y posterior implantación de tejido pseudomenstrual en ratones permite el desarrollo fiel de la endometriosis así como la monitorización no invasiva del desarrollo de la enfermedad en un modelo inmunocompetente. La inhibición del PAI-1 en dicho modelo disminuye el tamaño de la lesión endometriósica una vez ésta se encuentra bien establecida, pero no la elimina completamente, cursando a nivel histológico con descenso de los depósitos de fibrina, vascularización y proliferación celular. Si estudios posteriores, con evaluación del tamaño de la lesión a más largo plazo confirman nuestros hallazgos, el uso de inhibidores del PAI-1 podría incorporarse como arma terapéutica de uso clínico para tratar la endometriosis en un futuro.
