Importancia de los genes fur y thyA en la patogenia de Haemophilus parasuis

• Autores: Anna Bigas Terricabras
• Directores de la Tesis: María Elena Garrido Ocaña (dir. tes.), Montserrat Llagostera Casas (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat Autònoma de Barcelona ( España ) en 2007
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Miguel Viñas Ciordia (presid.), Susana Campoy Sánchez (secret.), Fernando Alcaide Fernández de Vega (voc.), Montserrat Bosch Gallego (voc.), Elisenda Miró (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
  • Ciencias agrarias
    • Ciencias veterinarias
      • Genética
      • Microbiología
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en:  TDX  DDD 
• Resumen

  • Haemophilus parasuis es un miembro de la familia Pasteurellaceae y un importante patógeno del tracto respiratorio porcino, causante de la enfermedad de Glässer. En la actualidad, esta enfermedad es una de las que tiene mayor incidencia en el sector porcino con una elevada repercusión económica. Por este motivo, es necesario estudiar la biología molecular de este patógeno para poder desarrollar vacunas más eficientes que las existentes hasta el presente. Para abordar dicho estudio es imprescindible disponer de algún proceso de transferencia genética eficaz en H. parasuis. No obstante, dado el desconocimiento que se tenía de dicho patógeno, no se conocía ningún mecanismo natural o de laboratorio que permitiera introducir DNA en H. parasuis. Por ello, el primer objetivo del presente trabajo ha sido desarrollar un método de transferencia genética en H. parasuis que permita estudiar posteriormente los genes implicados en su virulencia y en la colonización del hospedador.En la presente tesis se ha demostrado por vez primera que H. parasuis es capaz de transformar de forma natural si el DNA exógeno contiene la secuencia ACCGAACTC, la cual es muy similar al motivo ACCGCACTT descrito en H. influenzae como Uptake Signal Sequence. Además, se ha optimizado este proceso, determinando las concentraciones más adecuadas de células bacterianas, AMPc y DNA transformante, así como el tiempo de incubación. Un segundo objetivo de este trabajo ha sido averiguar el papel de la timidilato sintasa, enzima clave en la síntesis de desoxitimidina monofosfato (dTMP), en la virulencia de H. parasuis. Para ello, se ha construido un mutante knockout en el gen thyA de H. parasuis y se ha determinado la capacidad de colonización y la inmunogeniciad de la cepa salvaje y de dicho mutante thyA en un modelo animal de cobayas. Los resultados han mostrado que la cepa defectiva en la enzima timidilato sintasa tienen una menor capacidad de colonización, a pesar de que es capaz de inducir una respuesta inmune en el animal. Por ello, el mutante thyA de H. parasuis puede ser un buen candidato para el desarrollo de futuras vacunas.Finalmente, en este trabajo se ha estudiado la importancia de la proteína Fur en la virulencia de H. parasuis. Dicha proteína es un regulador pleiotrópico que, entre otras funciones, controla los mecanismos implicados en la captación de hierro. Para abordar esta parte del trabajo se propuso la construcción de un mutante de H. parasuis defectivo en la proteína Fur. Los resultados obtenidos han mostrado claramente que dicha proteína es esencial para la viabilidad de esta bacteria. Así, se ha determinado el entorno genético del gen fur y se ha confirmado la no viabilidad de los mutantes fur mediante la obtención de cepas merodiploides.