Resumen de Valor de las subpoblaciones de las células natural killer y del receptor de citotoxicidad natural NKp44 como biomarcadores de malignidad en derrames pleurales
El derrame pleural maligno es un problema clínico común en los pacientes con enfermedad neoplásica y su aparición es un signo de enfermedad avanzada ya que implica la afectación del espacio pleural por parte de dicho proceso maligno. La citometría de flujo es una técnica que permite un análisis rápido, preciso y reproducible de las células del líquido pleural, pudiendo complementar a la citología en el estudio de los derrames pleurales sospechosos de malignidad. Las células NK están en la primera línea de defensa tumoral, por lo que la determinación de las subpoblaciones de NK, especialmente las que tienen función citotóxica (NK CD56dim CD16-, NK CD56 dim CD16+, NK CD16+ y NK CD57+), en los derrames pleurales podría ayudar a establecer tanto la naturaleza neoplásica del derrame como el pronóstico de los pacientes con derrame pleural maligno. Entre los receptores responsables de la activación de las células NK destacan el CD16, responsable de la citotoxicidad dependiente de anticuerpo, y el NKp44 que expresa selectivamente la activación de las células NK. Por ello, el reconocimiento de las células NK activadas con la expresión de estos receptores podría orientarnos sobre la respuesta que tienen las NK frente a las células tumorales presentes en los derrames pleurales. Nuestra hipótesis, por tanto, es que el estudio de los diferentes fenotipos celulares presentes en el líquido pleural determinados mediante citometría de flujo, especialmente el estudio de las células NK, sus subpoblaciones y el receptor NKp44 como expresión de actividad celular, ayudaría al diagnóstico del derrame pleural maligno y podría ser un factor determinante en su pronóstico. Objetivos principales: 1. Establecer la utilidad de cuantificar las poblaciones linfocitarias, especialmente las células NK, en los derrames pleurales de etiología desconocida como posible indicador de malignidad (diferenciar entre malignos y benignos). 2. Evaluar el papel de las subpoblaciones de NK, principalmente las que tienen función citotóxica (NK CD56dim CD16-, NK CD56 dim CD16+, NK CD16+ y NK CD57+), en el diagnóstico del derrame pleural maligno. 3. Estudiar la aportación al diagnóstico de derrame pleural maligno del análisis de la ratio líquido pleural/sangre periférica (LP/SP), empleada habitualmente en el estudio de los derrames pleurales, de las poblaciones de NK. 4. Analizar el valor que NKp44 pudiera tener como biomarcador de malignidad del derrame pleural. Objetivos secundarios: 1. Evaluar si el estudio de NK, sus subpoblaciones y el del receptor NKp44 influyen en el pronóstico del paciente con derrame pleural maligno. 2. Evaluar si el estudio de la celularidad del líquido pleural combinado con las variables clínicas, radiológicas y analíticas también podría ser útil para ayudar a establecer el diagnóstico y/o pronóstico del derrame pleural. Material y Métodos: Se trata de un estudio cohorte observacional prospectivo de dos años de duración incluyendo pacientes que tienen derrame pleural de etiología desconocida que van a ser sometidos a una toracocentesis diagnóstica como un procedimiento incluido en el manejo habitual del paciente. Se ha realizado una cuantificación porcentual de las poblaciones linfocitarias en líquido pleural y sangre periférica respecto al 100% de los linfocitos totales mediante citometría de flujo, también se han contabilizado los porcentajes respecto a las NK totales de las subpoblaciones de NK utilizando los marcadores de antígenos de superficie CD3, CD56, CD16 y CD57 así como del receptor de citotoxicidad natural NKp44 (CD336). Entre otros resultados se han obtenido: - La determinación aislada del porcentaje de células NK y/o de sus subpoblaciones en líquido pleural de los derrames pleurales de etiología desconocida no permite diferenciar entre malignos y benignos. - El receptor de citotoxicidad natural NKp44, específico de la célula NK activada, no aporta valor al diagnóstico ni al pronóstico de los pacientes con derrame pleural, tampoco si es maligno. - La ratio LP/SP de las NK CD56 bright CD16- y NK CD56 dim CD16 -, poblaciones reguladoras y citotóxicas respectivamente, tienen una capacidad diagnóstica aceptable para discriminar un derrame pleural maligno o paramaligno del benigno. - El mejor factor pronóstico de mortalidad en los pacientes con derrame pleural maligno es la ratio LP/SP de la subpoblación NK CD16+ (HR 6,1). - Son los hallazgos clínicos (astenia), radiológicos (masa pulmonar en el TAC) y una ratio LP/SP de la subpoblación NK CD56 dim CD16+ (citotóxica) ? 0,43, las variables que más influyen para establecer el pronóstico del derrame pleural de etiología desconocida. Conclusiones: 1. La determinación aislada del porcentaje de células NK en líquido pleural de los derrames pleurales de etiología desconocida no permite diferenciar entre malignos y benignos. Tampoco la de sus subpoblaciones incluyendo las que tienen función citotóxica. 2. La determinación aislada del porcentaje en sangre periférica de las subpoblaciones NK CD56 dim CD16+ y NK CD16+, con función citotóxica dependiente de anticuerpo, es un test diagnóstico con una capacidad aceptable para discriminar un paciente con derrame pleural maligno de benigno, lo que sugiere una respuesta sistémica al tumor más que una respuesta local. 3. La ratio LP/SP de las NK CD56 bright CD16- y NK CD56 dim CD16 -, poblaciones de NK reguladora y citotóxica respectivamente sin expresión del antígeno de superficie CD16 responsable de la citotoxicidad dependiente de anticuerpo, tienen una capacidad diagnóstica aceptable para discriminar un derrame pleural maligno o paramaligno del benigno. 4. El receptor de citotoxicidad natural NKp44, específico de la célula NK activada, no aporta valor al diagnóstico ni al pronóstico en los pacientes con derrame pleural, tampoco en el derrame pleural maligno. 5. El mejor factor pronóstico de mortalidad en los pacientes con derrame pleural maligno es la ratio LP/SP de la subpoblación NK CD16+ (citotóxica dependiente de anticuerpo) incrementando el riesgo de muerte 6,1 veces. 6. La combinación de los hallazgos clínicos, radiológicos y de bioquímica del líquido pleural ayudan a establecer el diagnóstico de malignidad del derrame pleural. El análisis de la celularidad pleural no incrementa la posibilidad de un diagnóstico de malignidad en el árbol de decisión. 7. En cuanto al pronóstico, son los hallazgos clínicos (astenia), radiológicos (masa pulmonar) y una disminución de la ratio LP/SP de la subpoblación NK CD56 dim CD16+ (citotóxica), las variables que más influyen para establecer el pronóstico del derrame pleural.
