Resumen de Anàlisi dels mecanismes moleculars implicats en els processos de mort cel·lular causats per Roscovitina i 7-Bromoindirubina-3'-Oxima(7BIO)
Els compostos inhibidors de CDKs (de l'anglès, Cyclin Dependent Kinases) com la roscovitina són fàrmacs prometedors en el tractament del càncer. Són inductors efectius d'apoptosi en moltes cèl¿lules proliferants en cultiu. En aquesta tesi hem provat que el procés d'inducció d'apoptosi és mediat per les proteïnes BAX i BAK, la qual cosa indica que estem davant una via intrínseca canònica. Per caracteritzar millor aquesta via intrínseca, es va dur a terme una anàlisi per RT-MLPA (de l'anglès, Reverse Transcriptase-Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification). Aquesta anàlisi evidenciava una marcada reducció de la majoria de trànscrits, la qual cosa és consistent amb la ja descrita disrupció de la transcripció que s'esdevé de la inhibició de CDK7 i CDK9. Tanmateix, l'mRNA de PUMA s'escapava d'aquesta inhibició de la transcripció en les cèl¿lules de neuroblastoma amb la proteïna p53 funcional. Aquest augment de l'expressió, però, no correlacionava amb la inducció de l'apoptosi. Per contra, la depleció de la proteïna MCL-1 i del seu mRNA sí que correlacionava directament amb el dany cel¿lular. Com que també vam observar que la proteïna NOXA sofria una disminució més petita que la d'MCL-1, proposem que la disrupció d'aquest balanç esdevé un pas crític en la inducció d'apoptosi que fa la roscovitina i els seus compostos relacionats. Amb la finalitat de trobar nous inhibidors de CDKs, es va identificar la indirubina. Entre els varis derivats d'indirubina que es van sintetitzar, trobàvem 7-bromoindirubina-3'-oxima (7BIO), que provocava una mort cel¿lular independent de caspases. En totes les línies cel¿lulars testades fins la data, aquest tipus de mort cel¿lular s'ha caracteritzat com a necròtic. Tan aviat com 2-3 hores de tractament ja eren suficients per a que 7BIO col¿lapsés el potencial de membrana mitocondrial (¿¿m). El procés era independent de BAX i BAK, ja que la viabilitat cel¿lular i el ¿¿m queien indistintament tant en els MEFs (de l'anglès, Mouse Embryonic Fibroblasts) Bax-/-Bak-/- com en els salvatges (wt). És més, la inhibició farmacològica del PTPC (de l'anglès, Permeability Transition Pore Complex) no prevenia la pèrdua de ¿¿m causada per 7BIO. Es van analitzar els components que regulen el ¿¿m i va aparèixer una marcada disminució en el contingut de coenzima Q (CoQ). Pel que sabem fins ara, aquestes característiques són úniques. En conclusió, proposem que 7BIO desencadena un tipus de mort cel¿lular necròtica que sembla de gran interès en la necrobiologia. http://www.tdx.cat/TDX-0208111-160516
