Estrategias para el rescate de ovocitos humanos inmaduros tras estimulación ovárica controlada en tratamientos de reproducción asistida

• Autores: Cristina Costana Duque Royo
• Directores de la Tesis: Rita Pilar Cervera Juanes (dir. tes.), Miodrag Stojkovic (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad de Zaragoza ( España ) en 2014
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Alberto Romeu Sarrió (presid.), Pedro Muniesa Lorda (secret.), Miguel Angel Silvestre Camps (voc.)
• Materias:
  • Ciencias médicas
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Zaguán
• Resumen

  • En la especie humana la mayoría de los ovocitos obtenidos tras la realización de un ciclo de estimulación ovárica controlada (mediante el empleo de gonadotropinas) se encuentran en el estadio de metafase II (ovocito maduro). No obstante, aproximadamente un 15-20% de los ovocitos recuperados se encuentran en los estadios de metafase I y vesícula germinal y son normalmente descartados debido a su limitada capacidad de desarrollo embrionario. Sin embargo, en algunos casos en los que se recupera un número limitado de ovocitos en estadio de metafase II, la maduración in vitro de los ovocitos inmaduros se presentaría como una opción para aumentar el número de ovocitos a fecundar y por tanto, de embriones a transferir a la paciente. Además de su aplicación clínica, estos ovocitos suponen una fuente potencial para la investigación, tanto de la maduración ovocitaria como para aplicaciones en medicina regenerativa. Pese a su posible utilización en reproducción e investigación, las condiciones de cultivo existentes para ovocitos inmaduros denudados no han sido optimizadas. En el presente trabajo se han evaluado diferentes medios de maduración in vitro y se ha investigado la competencia de los ovocitos inmaduros tras su maduración in vitro. Para ello se evaluaron los siguientes parámetros: tasa de maduración in vitro, configuración del huso meiótico/organización cromosómica, número de copias de ADN mitocondrial y expresión de receptores hormonales y factores de crecimiento. Además, se valoró su capacidad de desarrollo embrionario tras activación partenogenota. Para favorecer la maduración citoplasmática de los ovocitos en vesícula germinal, se utilizaron dos estrategias. Por un lado, se cultivaron los ovocitos en presencia del inhibidor de la maduración nuclear, cilostamida. Por otro lado, se creó una matriz tridimensional entre el ovocito y las células del cúmulo que permitió la reconstrucción del complejo cúmulo-corona-ovocito. Además, el co-cultivo tridimensional también se suplementó con cilostamida para potenciar el efecto de ambas opciones. Y finalmente, se evaluó la competencia ovocitaria según su capacidad para generar células madre embrionarias partenogenotas humanas.