Resumen de Validación de PCR para detección de Listeria monocytogenes en carnes de res y pollo

Kirvis Torres, Raúl Poutou Piñales, Ana Carrascal, Sara Sierra, Marcela Mercado

• español

  Listeria monocytogenes es un microorganismo zoonótico emergente en la industria de alimentos, resultando de gran interés para la salud pública. El objetivo de este trabajo fue validar la técnica de PCR para la detección de este microorganismo en carnes crudas de res y pollo. El procedimiento de extracción de ADN fue realizado con lisozima, proteinasa K y fenol-cloroformo a partir de muestras contaminadas artificialmente. La especificidad de los cebadores LI1 y U1 fue comprobada por la amplificación de una banda de 938pb correspondiente a un fragmento del ADNr 16S; de igual manera los cebadores LF y LR amplificaron una banda del gen hlyA de 750pb; lo que permitió la identificación de género (banda 938pb) y especie (banda de 750pb) respectivamente.

  Las cepas de los otros géneros bacterianos ensayados no amplificaron ninguna de las bandas específicas. El límite de detección para la PCR fue de 102 y 104 UFC/gr para carnes de res y pollo respectivamente; el «Gold Standard» reportó 102 UFC/ml para ambos alimentos. La comparación de la PCR vs., el método «Gold Standard» reportó en carne de pollo una concordancia observada de 98.43%, una sensibilidad del 96.9%, una especificidad de 100%, un valor predictivo positivo del 100% y un valor predictivo negativo del 97%; para la carne de res todos los parámetros anteriores fueron del 100%. Estos resultados demostraron la factibilidad de la PCR para el control de calidad de carnes crudas de res y pollo.

• English

  Listeria monocytogenes is a zoonotic emergent microorganism in the food industry, being from great interest for the public health. The aim of this work was to validate the PCR technique for the detection of Listeria monocytogenes in raw meats of beef and chicken. The DNA extraction procedure was carried out with lisozyme, proteinase K and phenol-cloroform, starting from artificially contaminates samples. The specificity of primers LI1 and U1 was verified by the amplification of a 938bp band corresponding to a fragment of rDNA 16S; in the same way the «primers» LF and LR amplified a band of 750bp corresponding to the hlyA gene; allowing the genus (938bp band) and species (750bp band) identification respectively. Other bacterial strains assayed did not amplify any of the Listeria specific bands. The detection limit for PCR was of 102 and 104 UFC/gr on beef and chicken meat respectively; the Gold Standard reported 102 UFC/ml in both cases. The comparison of the PCR versus the Gold Standard method reported upon chicken meat an observed concordancy of 98,43%, a sensitivity of 96,9%, an specificity of 100%, a positive predictive value of 100% and a negative predictive value of 97%; for beef all the previously parameters were 100%. This results showed the feasibility of the PCR for the quality control on raw beef and chicken.