Miniprep for chloroplast and mitochondria enrichment and DNA extraction

• Autores: Ma. Emma Morales-Gutiérrez, María Alejandra Gutiérrez Espinosa, Amalio Santacruz Varela, Iván Ramírez Ramírez, Mario Pérez Grajales, Víctor A. González Hernández
• Localización: Agrociencia, ISSN 2521-9766, ISSN-e 1405-3195, Vol. 50, Nº. 8, 2016, págs. 977-988
• Idioma: inglés
• Títulos paralelos:
  • Microtécnica de enriquecimiento y extracción de ADN de cloroplastos y mitocondrias
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• Resumen
  • español

    Los protocolos publicados para enriquecimiento de ADN de cloroplasto y mitocondrial están basados en muestras grandes (más de 5 g) que implican costos altos y abundante material de muestra. La reducción en cantidades de muestra de tejido y de reactivos es posible y conveniente. Esta investigación describe una microtécnica eficiente para enriquecimiento y extracción de ADN de cloroplasto y mitocondria desde muestras de 500 mg de pericarpio de frutos de chile Manzano (Capsicum pubescens R. & P.). La eficiencia de la extracción en muestras de fruto fresco fue 20 µg ADN g-1 para cloroplastos, y 33 µg g-1 ADN de mitocondrias. El aislamiento con la microtécnica recomendada redujo costos en 160x para cloroplastos y hasta 8x para mitocondrias. La amplificación por PCR de los genes marcadores de referencia de cloroplasto (rbcL, subunidad grande de la Rubisco) y mitocondria (cox1, citocromo oxidasa) confirmó la identidad de ADN de cada extracción.

  • English

    Published protocols for chloroplast and mitochondrial DNA enrichment are based on large samples (more than 5 g) which imply high costs and plenty of sample material. Reduction of tissue sample and reagent quantities is possible and convenient. This work describes an efficient miniprep for chloroplast and mitochondria DNA enrichment and extraction from 500 mg of pericarp samples of Manzano chili fruits (Capsicum pubescens R. & P.). Extraction efficiency from fresh fruit samples was 20 µg DNA g-1 for choloroplasts and 33 µg DNA g-1 for mitochondria. Isolation using the recommended miniprep resulted in costs reduction of 160x for chloroplast and up to 8x for mitochondria. PCR amplification of reference marker genes for chloroplast (rbcL, Rubisco large subunit) and mitochondria (cox1, Cytochrome oxidase) confirmed DNA identity of each extraction.