Producción de embriones transgénicos bovinos por microinyección de un vector lentiviral pre y pos fertilización

• Autores: Rafael José Otero Arroyo, Darwin Yovanny Hernández Herrera, Jair Pérez
• Localización: Biotecnología en el Sector Agropecuario y Agroindustrial: BSAA, ISSN-e 1909-9959, ISSN 1692-3561, Vol. 18, Nº. 1 (Enero-Junio), 2020, págs. 64-73
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Produção de embriões transgênicos bovinos por microinjeção de um vetor lentiviral pré e pós-fertilização
  • Production of bovine transgenic embryos by microinjection of a lentiviral vector pre and post fertilization
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• Resumen
  • español

    El objetivo de esta investigación fue comparar la eficiencia de la microinyección de un vector lentiviral portador del gen eGFP en ovocitos maduros (PRE) y en cigotos (POS) seis horas después de la fertilización in vitro (FIV). Para ello, 1777 ovocitos maduros, fueron distribuidos en 7 tratamientos, uno control (T1), tres PRE (T2PRE, T3PRE y T4PRE) y tres POS (T2POS, T3POS y T4POS) los cuales fueron microinyectados antes (PRE) y después (POS) de la FIV. Los tratamientos T4PRE y T4POS fueron microinyectados con el vector lentiviral. Se evaluó la tasa de producción de blastocistos al día ocho y la expresión de la proteína eGFP en T4PRE y T4POS. No se encontraron diferencias en la tasa de producción de blastocistos entre el tratamiento T1 (20,2%), los controles de cultivo (T2PRE y T2POS) y los controles de microinyección (T3PRE y T3POS). La presencia del vector lentiviral disminuyó (p<0,05) la tasa de formación de blastocistos en los grupos T4PRE y T4POS (5,5 y 3,5%, respectivamente). Todos los blastocistos producidos en T4PRE y el 71,4% producidos en el T4POS expresaron la proteína eGFP (p<0,05), principalmente en el trofoectoderma y en la masa celular interna del blastocisto.

  • English

    The objective of this research was to compare the efficiency of microinjection of a lentiviral vector carrying the eGFP gene in mature oocytes (PRE) and zygotes (POS) six hours after in vitro fertilization (IVF). For this, 1777 mature oocytes were distributed in 7 treatments, one control (T1), three PRE (T2PRE, T3PRE and T4PRE) and three POS (T2POS, T3POS and T4POS) which were microinjected before (PRE) and after (POS) of IVF. The T4PRE and T4POS treatments were microinjected with the lentiviral vector. The blastocyst production rate at day eight and the expression of the eGFP protein in T4PRE and T4POS were evaluated. No differences were found in the blastocyst production rate between the T1 treatment (20,2%), the culture controls (T2PRE and T2POS) and the microinjection controls (T3PRE and T3POS). The presence of the lentiviral vector decreased (p<0,05) the blastocyst formation rate in the T4PRE and T4POS treatments (5,5 and 3,5%, respectively). All blastocysts produced in T4PRE and 71,4% produced in T4POS expressed the eGFP protein (p<0,05), mainly in the trophectoderm and in the internal cell mass of the blastocyst.

  • português

    O objetivo desta pesquisa foi comparar a eficiência da microinjeção de um vetor lentiviral portador do gene eGFP em oócitos maduros (PRE) e zigotos ( POS) seis horas após a fertilização in vitro (FIV). Para isso, 1777 oócitos maduros foram distribuídos em 7 tratamentos, um controle (T1), três PRE (T2PRE, T3PRE e T4PRE) e três POS (T2POS, T3POS e T4POS) que foram microinjetados antes (PRE) e depois (POS ) da fertilização in vitro. Os tratamentos T4PRE e T4POS foram microinjetados com o vetor lentiviral. A taxa de produção de blastocistos no dia oito e a expressão da proteína eGFP em T4PRE e T4POS foram avaliadas. Não foram encontradas diferenças na taxa de produção de blastocistos entre o tratamento T1 (20,2%), nos controles da cultura (T2PRE e T2POS) e nos controles de microinjeção (T3PRE e T3POS). A presença do vetor lentiviral diminuiu (p<0,05) a taxa de formação de blastocistos nos grupos T4PRE e T4POS (5,5 e 3,5%, respectivamente). Todos os blastocistos produzidos em T4PRE e 71,4% produzidos em T4POS expressaram a proteína eGFP (p<0,05), principalmente na trofoectoderma e na massa celular interna do blastocisto.