Caracterización bioquímica y molecular de una esterasa fúngica: aplicación en la industria papelera

• Autores: Olga Calero Rueda
• Directores de la Tesis: María Jesús MartÍnez Hernández (dir. tes.)
• Lectura: En la Universidad Complutense de Madrid ( España ) en 2006
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: José M. Peinado (presid.), Belén Patiño Alvarez (secret.), Antonio Ballesteros Olmo (voc.), Francisco José Plou Gasca (voc.), Ángeles Sanromán Braga (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Microbiología
      • Hongos
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: Digital CSIC
• Resumen

  • En este trabajo se describe una nueva esterasa fúngica producida en cultivos líquidos del hongo Ophiostoma piceae. Los preparados enzimáticos comercializados hasta la fecha, aunque son eficaces en el control biológi-co del pitch en coníferas, no rinden buenos resultados en las maderas de frondosas. Este hecho motivó la búsqueda de una enzima capaz de de-gradar los compuestos involucrados en la formación de depósitos en es-tas especies vegetales. Estudios preliminares pusieron de manifiesto la actividad enzimática del hongo O. piceae sobre ésteres de p-nitrofenol y oleato de colesterilo. Éste último fue escogido como modelo de los éste-res de esteroles presentes en los extraíbles de la madera de Eucaliptus globulus, especie empleada mayoritariamente en España para la produc-ción de pasta de papel. Inicialmente se estudiaron varias actividades enzimáticas, utilizando un medio basal que contenía glucosa, como fuente de carbono y aceite de oliva, como inductor. En estas condiciones, se purificó y caracterizó u-na única enzima. Ésta mostraba una elevada afinidad sobre triglicéridos y ésteres de esteroles. La degradación de mezclas complejas de estos compuestos, presentes en los extraíbles y pastas de papel de diferentes especies vegetales, evidenciaron la posible aplicación de la esterasa en el control biológico del pitch en madera de frondosas y coníferas. La determinación del extremo N-terminal de la proteína y péptidos in-ternos, resultado de la hidrólisis de la misma, permitieron obtener una sonda de DNA específica. De esta forma, se pudo llevar a cabo la se-cuenciación del gen de la esterasa de O. piceae. La comparación con los genes de otras esterasas mostró una homología de aproximadamente un 40% con los que codifican las lipasas de Candida rugosa y Geotrichum candidum. A partir de estos estudios, se pudieron identificar los residuos implicados en la catálisis de la enzima. El modelo estructural de la este-rasa, construido a partir de las estructuras cristalográficas de las lipasas CRL1 y CRL3 de C. rugosa, permitió englobar a la enzima en la familia de las a/ß hidrolasas, así como identificar algunos de los aminoácidos responsables de su especificidad de sustrato.