Detección molecular del virus de la hepatitis E en hígados destinados para consumo humano y heces de cerdos en el estado de Nuevo León, México

• Autores: Marco Antonio Cantú Martínez
• Directores de la Tesis: Ramiro Avalos Ramírez (dir. tes.), Artur Xavier Roig Sagués (dir. tes.), María Manuela Hernández Herrero (tut. tes.)
• Lectura: En la Universitat Autònoma de Barcelona ( España ) en 2016
• Idioma: español
• Tribunal Calificador de la Tesis: Marta Capellas Puig (presid.), Sílvia de Lamo Castellví (secret.), Julieta Pereda (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
    • Virología
  • Ciencias agrarias
    • Ciencias veterinarias
      • Virología
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en:  TESEO  TDX 
• Resumen

  • El virus d'Hepatitis E (VHE), és un virus hepatotròpic que es transmet per via fecal-oral a través d'aigua i aliments contaminats. L'objectiu d'aquest treball és determinar la presència i circulació del VHE en fetges de porcs destinats per a consum humà en l'Estat de Nuevo León, Mèxic, mitjançant tècniques moleculars de diagnòstic. Per a això es van mostrejar porcs en les seves diferents etapes de desenvolupament de 13 municipis, es van prendre 87 fetges de porcs sacrificats en escorxadors TIF i 50 fetges de carnisseries, a més es van recol·lectar 233 mostres fecals de 26 granges. Per a la detecció del VHE es va utilitzar RT-PCR i PCR-semi-niuat; Es va amplificar un fragment de 212 pb del gen ORF2 del VHE. De les 87 mostres de rastres i dels 50 fetges de carnisseries solament van ser positius 17 (19.54%) i 9 (18%) respectivament, a més de 233 mostres fecal només 41 (17.53%) van donar positives, aquestes corresponen a 9 granges de diferents parts de l'Estat. Es va obtenir la seqüència de 172-174 nucleòtids a partir de 5 mostres positives a RT-PCR i PCR-seminiuat. Les seqüències van ser denominades sw4NL-Mx-1, sw5NL-Mx-1, sw7NL-Mx-1, sw8NL-Mx-1 i sw9NL-Mx-1; conforme van ser realitzades les anàlisis de seqüenciació. Les relacions evolutives de les seqüències amb seqüències de referència de la família Hepeviridae van ser calculades mitjançant anàlisis filogenètiques utilitzant el mètode de Neighbor-joining i aplicant 1,000 repeticions en les anàlisis de Bootstrap. No obstant això, i d'acord amb la topologia de l'arbre filogenètic obtingut, aquestes seqüències conformen dos grups de virus evolutivament relacionats però segregats en dos subgrups diferents, el genotip 3 del VHE i un nou genotip. Aquest és el primer estudi que aporta evidència de la presència del genotip 3 del VHE en granges i porcs sacrificats a l'Estat de Nuevo León, concloent que el consum de fetges pot constituir un important factor de risc per a la salut humana. El virus de Hepatitis E (VHE), es un virus hepatotrópico que se transmite por vía fecal-oral a través de agua y alimentos contaminados. El objetivo de este trabajo es determinar la presencia y circulación del VHE en hígados de cerdos destinados para consumo humano en el Estado de Nuevo León, México, mediante técnicas moleculares de diagnóstico. Para ello se muestrearon cerdos en sus diferentes etapas de desarrollo de 13 municipios, se tomaron 87 hígados de cerdos sacrificados en rastros TIF y 50 hígados de carnicerías, además se recolectaron 233 muestras fecales de 26 granjas. Para la detección del VHE se utilizó RT-PCR y PCR-semi-anidado; Se amplificó un fragmento de 212 pb del gen ORF2 del VHE. De las 87 muestras de rastros y de los 50 hígados de carnicerías solamente fueron positivos 17(19.54%) y 9(18%) respectivamente, además de 233 muestras fecales solo 41(17.53%) dieron positivas, estas corresponden a 9 granjas de distintas partes del Estado. Se obtuvo la secuencia de 172-174 nucleótidos a partir de 5 muestras positivas al RT-PCR y PCR-semianidado. Las secuencias fueron denominadas sw4NL-Mx-1, sw5NL-Mx-1, sw7NL-Mx-1, sw8NL-Mx-1 y sw9NL-Mx-1; conforme fueron realizándose los análisis de secuenciación. Las relaciones evolutivas de las secuencias con secuencias de referencia de la familia Hepeviridae fueron calculadas mediante análisis filogenéticos usando el método de Neighbor-Joining y aplicando 1,000 repeticiones en los análisis de Bootstrap. No obstante, y acorde a la topología del árbol filogenético obtenido, estas secuencias conforman dos grupos de virus evolutivamente relacionados pero segregados en dos subgrupos distintos, el genotipo 3 del VHE y un nuevo genotipo. Este es el primer estudio que aporta evidencia de la presencia del genotipo 3 del VHE en granjas y cerdos sacrificados en el Estado de Nuevo León, concluyendo que el consumo de hígados puede constituir un importante factor de riesgo para la salud humana. Hepatitis E virus (HEV) is a hepatotropic virus transmitted by the fecal-oral route via contaminated water and food. The aim of this study is to determine the presence and circulation of HEV in pig livers intended for human consumption in the state of Nuevo Leon, Mexico, using molecular diagnostic techniques. To do this pigs were sampled at different stages of development of 13 municipalities, 87 livers of pigs slaughtered in TIF slaughterhouses and 50 livers from butchers were taken, plus 233 fecal samples collected from 26 farms. RT-PCR and semi-nested-PCR was used to detect HEV; A fragment of 212 bp of HEV ORF2 gene was amplified. Of the 87 samples of trails and 50 livers frombutchers only 17 (19.54%) and 9 (18%) were positive respectively, and of 233 fecal samples only 41 (17.53%) were positive, corresponding to 9 different farms from different parts of the state. The sequences of nucleotides 172-174 from 5 positive samples RT-PCR and PCR-seminested were obtained. Sequences were called sw4NL-Mx-1 sw5NL-Mx-1 sw7NL-Mx-1 sw8NL-Mx-1 and sw9NL-Mx-1; They were carried out under the sequencing analysis. The evolutionary relationships of the sequences with reference sequences of Hepeviridae family were calculated by phylogenetic analysis using the method of Neighbor-Joining and applying 1,000 repetitions in the analysis Bootstrap. Nevertheless, according to the topology of the phylogenetic tree obtained, these sequences form two groups of evolutionarily related viruses but segregated into two distinct subgroups, genotype 3 HEV and a new genotype. This is the first study that provides evidence of the presence of HEV genotype 3 in pigs slaughtered from farms in the State of Nuevo Leon, concluding livers consumption may be an important risk factor for human health.