Desarrollo de métodos rápidos para la detección de bacteriófagos como indicadores de contaminación fecal
- Autores: Daniel Toribio
- Directores de la Tesis: Anicet R. Blanch (dir. tes.), María Teresa Muniesa Pérez (codir. tes.), Francisco Lucena Gutiérrez (tut. tes.)
- Lectura: En la Universitat de Barcelona ( España ) en 2021
- Idioma: español
- Tribunal Calificador de la Tesis: Anna Puig (presid.), Cristina García Aljaro (secret.), Antoni Munné Torras (voc.)
- Programa de doctorado: Programa de Doctorado en Biotecnología por la Universidad de Barcelona
- Materias:
- Enlaces
- Tesis en acceso abierto en: TESEO
- Resumen
El control de la transmisión de patógenos víricos a través de la ruta fecal-oral ha adquirido recientemente relevancia e interés público. Para mantener este control, es necesario determinar indicadores apropiados para la predicción de comportamiento y transmisión de los virus en las matrices ambientales. Los bacteriófagos han sido propuestos como indicadores víricos de contaminación fecal desde hace varias décadas y están siendo incorporados gradualmente como organismos indicadores en numerosas normativas de gestión del agua, como las nuevas directivas de la Unión Europea para el control de calidad de aguas de consumo y aguas regeneradas. Como consecuencia, será necesario disponer de métodos que permitan detectar bacteriófagos de manera sencilla, rápida, robusta y eficiente. Esta necesidad ha impulsado la mejora y el desarrollo de nuevos métodos de detección, ya que los métodos tradicionales requieren más de un día de trabajo para proporcionar resultados y pueden ser difíciles de implementar en laboratorios de análisis rutinario. Bajo este contexto se ha desarrollado el método Bluephage, un método colorimétrico que permite la detección cualitativa de los diferentes grupos de colifagos mediante la liberación de la enzima β-glucuronidasa al exterior celular por la lisis bacteriana. Este método es posible gracias a una serie de modificaciones genéticas realizadas en las cepas huéspedes empleadas para la detección de colifagos, bloqueando el transporte de los sustratos de la enzima al interior celular y sobreexpresando la enzima intracelularmente. Sólo después de la lisis mediada por fagos, la enzima sobreexpresada puede salir de la célula, encontrar el sustrato en el medio, degradarlo y producir un cambio colorimétrico del medio de amarillo a azul. Este método supone una mejora respecto a los métodos tradicionales, ya que permite la detección en menos de 6 horas de hasta 1 colifago en volúmenes de muestra de hasta 100 ml. Presenta una sensibilidad, especificidad y precisión equivalentes a los métodos estandarizados y es adaptable a volúmenes de muestra grandes y pequeños, a muestras de diferentes orígenes, a la detección de todos los grupos de colifagos y a resultados cuantitativos mediante la aplicación de la técnica del Número Más Probable sobre los resultados cualitativos. En definitiva, Bluephage es el método microbiológico más rápido descrito hasta la fecha para la detección de contaminación fecal utilizando microorganismos cultivables y puede proveer resultados cuando la información rápida de contaminación fecal es esencial.
