Resumen de Trypsin from jumbo squid (dosidicus gigas) hepatopancreas: Purification and characterization

Ana Gloria Villalba Villalba, Enrique Márquez Ríos, Josafat Marina Ezquerra Brauer, Francisco Javier Castillo Yáñez

• español

  Se logró purificar tripsina del hepatopancreas de Dosidicus gigas por fraccionación con sultafo de amonio (30-70% de saturación), cromatografía de filtración en gel, afinidad e intercambio iónico. El peso molecular de la tripsina fue de 23,5 kDa, según la electroforesis SDS-PAGE y mostró una sola banda en el zymograma. La enzima mostró máxima actividad a pH 8,5 y 40ºC, usando BAPNA como sustrato. La actividad de la enzima se afectó de manera efectiva por el metil fenil sulfonil fluoruro (PMSF) (98%) y por Nα-p-tosil-L-lisina clorometil cetona (TLCK) (99%). Además la actividad de la enzima fue afectada por los suguientes iones en orden decreciente:

  Hg2+, Fe2+, Cu2+, Li1+, Mg2+, K1+, Mn2+, Ca2+. Por otro lado la actividad de la enzima disminuyó de manera progresiva a medida que aumentó la concentración de NaCl de 0 a 30%. Los valores de Km y kcat fueron de 0,085 ± 1,45 mM y 1,76 ± 0,12s-1, respectivamente. Según los resultados obtenidos se sugiere que la enzima presenta potencial de uso biotecnológico.

• English

  Trypsin was purified from the hepatopancreas of Dosidicus gigas by fractionation with ammonium sulfate (30-70% saturation), gel filtration, affinity and ion exchange chromatography. The molecular weight of the trypsin obtained was ~23.5kDa according to sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and, showed a single band in the zymogram.

  The enzyme exhibited maximal activity at pH 8.5 and 40ºC, using BAPNA as substrate. It was effectively inhibited by phenyl methyl sulfonyl fluoride (PMSF) (98%), and Nα-p-Tosyl-L-lysine chloromethyl ketone (TLCK) (99%). Enzyme activity was affected by the following ions in decreasing order: Hg2+, Fe2+, Cu2+, Li1+, Mg2+, K1+, Mn2+, Ca2+. Trypsin activity decreased continuously as NaCl concentration increased from 0 to 30%. Km and kcat values were 0.085 ±1.45mM and 1.76 ±0.12s-1, respectively. The results suggest that the purified enzyme a potential agent to be used in biotechnological processes.

• português

  Foi possível purificar tripsina do hepatopâncreas de Dosidicus gigas por fracionamento com sulfato de amônio (30- 70% de saturação), cromatografia de filtração em gel, afinidade e troca iônica. O peso molecular da tripsina foi de 23.5 kDa, segundo a eletroforese SDS-PAGE e mostrou uma só faixa no zimograma. A enzima mostrou máxima atividade em pH 8.5 e 40ºC, usando BApNA como substrato. A atividade da enzima foi afetada de maneira efetiva por metil-fenil-sulfonil fluoreto (PMSF) (98%) e por Nα-p-tosil-L-lisina clorometil cetona (TLCK) (99%). Também a atividade da enzima foi afetada pelos seguintes íons em ordem decrescente:

  Hg2+, Fe2+, Cu2+, Li1+, Mg2+, K1+, Mn2+, Ca2+. Por outro lado, a atividade da enzima diminuiu de maneira progressiva na medida em que aumentou a concentração de NaCl de 0 a 30%. Os valores de Km e kcat foram de 0.085 ± 1.45 mM e 1.76 ± 0.12 s-1, respectivamente. Segundo os resultados obtidos, sugere-se que a enzima apresenta potencial de uso biotecnológico.